Formation : Electrophorèse des proteines en gel de polycrylamide en présence de SDS (SDS Page). Analyse des protéines par "Western Blot" après SDS Page

THEORIE

RAPPEL SUR LA STRUCTURE DES PROTEINES

• Rôle des acides aminés, de la liaison peptidique, de la liaison hydrogène, des interactions hydrophobes, des interactions ioniques, des modifications post-traductionnelles dans la structure primaire, secondaire, tertiaire et quaternaire des protéines

NOTIONS DE POIDS ET DE MASSE MOLECULAIRE,

LES CONDITIONS DE SOLUBILISATION DES PROTEINES

• Rôle du pH, des détergents ioniques, non ioniques, des zwitterrions, rôle de l’urée

PRINCIPES DE LA SEPARATION DES PROTEINES PAR ELECTROPHORESE

L’ E L E C T R O P H O R E S E D E S P R O T E I N E S E N GEL DE POLYACRYLAMIDE EN PRESENCE DE SDS (SDS-PAGE)

LES CONDITIONS DE L’ELECTROPHORESE – LES PARAMETRES ELECTRIQUES

REVELATION ET IDENTIFICATION DES PROTEINES (différentes méthodes de coloration, y compris la coloration à l’argent)

PRINCIPE DU TRANSFERT DES PROTEINES POUR LE « WESTERN BLOT » (WB)

METHODES DE TRANSFERT DES PROTEINES SUR MEMBRANE APRES SDS-PAGE

METHODES DE REVELATION ET D’IDENTIFICATION DES PROTEINES D’INTERET

• Questions / réponses à des problèmes concrets

TRAVAUX PRATIQUES

• Découverte de la méthodologie et des appareils Démonstration de la procédure
• Préparation des tampons, des solutions et des réactifs
• Préparation et polymérisation des gels de polyacrylamide
• Dépôt des échantillons
• Séparation des protéines par SDS-PAGE
• Coloration des protéines au bleu de Coomassie
• Coloration des protéines à l’argent
• Transfert des protéines sur membrane après séparation par électrophorèse
• Révélation des protéines séparées par SDS-PAGE et transférées sur membrane (WB)
• Questions / réponses à des problèmes concrets