Formation : Electrophorèse capillaire pour les molécules biologiques dans le domaine pharmaceutique

THEORIE

GENERALITES SUR LES TECHNIQUES ELECTROCINETIQUES

• De l’électrophorèse capillaire de Zone à la chromatographie électrocinétique
• Les phénomènes de transport : migration électrophorétique et écoulement électroosmotique
• Aspects instrumentaux
• Modes de détection (UV-Vis, fluorescence induite par laser LIF, conductimétrie, spectrométrie de masse)
• Analyse quantitative : les modes d’injection, de préconcentration et de quantification

LES MODES DE SEPARATION ELECTROCINETIQUES POUR L’ANALYSE DES MOLECULES BIOLOGIQUES

• Electrophorèse capillaire de zone en milieu libre
• Séparation des acides aminés et peptides
  - Spécificités liées à l’analyse des protéines
  - Caractérisation de la glycosylation des anticorps : séparation par électrophorèse capillaire couplée à la détection par fluorescence induite par laser LIF après clivage et dérivation
  - Exemples de séparation

CHROMATOGRAPHIE ELECTROCINETIQUE CAPILLAIRE

• Séparation de peptides ou d’acides aminés dérivés en chromatographie électrocinétique micellaire, séparations chirales en présence de pseudo-phases stationnaires chirales

ELECTROPHORESE CAPILLAIRE SUR GEL

• Séparation des protéines, anticorps et des oligonucléotides en fonction de leur taille, détermination des masses moléculaires, de la pureté

FOCALISATION ISOELECTRIQUE

• Séparation des protéines en fonction de leur point isoélectrique

DEMONSTRATIONS AU LABORATOIRE

ELECTROPHORESE CAPILLAIRE DE ZONE

• Influence des principaux paramètres expérimentaux : pH de l’électrolyte, force ionique de l’électrolyte, température, tension appliquée. Mesure des temps de migration et des efficacités de séparation - Calculs des mobilités électroosmotique - Ordre de migration

SEPARATION SUR GEL

• Caractérisation des anticorps monoclonaux et de leurs fragments en fonction de leur taille (électrophorèse sur gel en milieu dénaturant avec détection UV) - Détermination de la masse moléculaire de protéines, d’oligonucléotides

FOCALISATION ISOELECTRIQUE CAPILLAIRE