Chromatographie liquide couplée avec la spectrométrie de masse appliquée aux protéines.

CHROMATOGRAPHIE EN PHASE LIQUIDE

• Brève révision des principes généraux de la chromatographie en phase liquide
• Appareillages

SPECTROMETRIE DE MASSE : PRINCIPES FONDAMENTAUX NECESSAIRES A LA REALISATION D’UN COUPLAGE

• Description générale d’un spectromètre de masse
  - Les différents modes d’ionisation et de source (APCI, Electrospray)
  - Les analyseurs (Quadripôle, triple quadripôle, ToF et QqToF, QTrap)
  - Notion de masse, motif isotopique et résolution
• Principes des spectres MS-MS de peptides
• Différentes exemples de couplage : LC-MS, LC-MS/MS, LC-MS Haute Résolution
• Choix de la stratégie, de l’analyseur

TRAVAUX PRATIQUES EN LABORATOIRE

• Analyse d’échantillons protéiques par couplage LC-MS/MS
  - Préparation de l’échantillon
  - Choix des paramètres à optimiser (conditions chromatographiques, conditions d’ionisation, paramètres d’acquisition)
  - Traitement de données MS
  - Interprétation spectrale
  - Identification des protéines (choix de la base de données…)
  - Pertinence des résultats
• Exemples d’application : répertoire de protéines d’un échantillon complexe, étude de modifications post-traductionnelles de protéines, quantification relative de protéines