Chromatographie en phase liquide à haute performance couplée avec la spectrométrie de masse (LC-MS, LC-MS/MS) - Application à l'analyse des petites molécules.

THEORIE

RAPPEL RAPIDE DE CHROMATOGRAPHIE EN PHASE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE (HPLC)

• Révision des principes généraux et grandeurs fondamentales de la chromatographie en phase liquide
• Présentation des différents appareillages
• Optimisation d’une méthode de séparation ou comment identifier les paramètres et les contraintes liés à la substance (nature, propriété physico-chimique, stabilité) et à la méthode analytique (sélectivité, sensibilité)

SPECTROMETRIE DE MASSE : PRINCIPES FONDAMENTAUX NECESSAIRES A LA REALISATION D’UN COUPLAGE

• Description générale d’un spectromètre de masse
  - Les différents modes d’ionisation et sources (APCI, Electrospray, MALDI)
  - Les analyseurs (Quadripôle, triple quadripôle, ToF et QqToF, QTrap)
• Définition de la résolution, principes des spectres MS
  - MS
  - Différentes stratégies de couplage : LC-MS, LC-MS/MS, LC-MS Haute Résolution
  - Choix de la stratégie, de l’analyseur

MARCHE A SUIVRE POUR LE DEVELOPPEMENT D’UNE METHODE COUPLEE

• Aspects techniques et pratiques du développement d’un couplage LC-MS

OPTIMISATION D’UNE METHODE LC-MS

• Paramètres de détection, de source, séparation
• Comment identifier les paramètres et les contraintes liés à la matrice (complexité, effet de matrice, préparation d’échantillon) ?

TRAITEMENT DE DONNEES – QUANTIFICATION

PERTINENCE DES RESULTATS

• Différentes normes
  - Différents critères

TRAVAUX DIRIGES

• Identification des différentes étapes de développement et des paramètres clés à optimiser dans plusieurs exemples tirés de la littérature

TRAVAUX PRATIQUES

TRAVAUX PRATIQUES SUR UN COUPLAGE LC-MS HAUTE RESOLUTION

• Présentation de l’appareillage
• Calibration (externe, externe proche, interne)
• Différentes sources (ESI, APCI, DIP) et différents modes d’acquisition
• Logiciel de retraitement

TRAVAUX PRATIQUES SUR UN COUPLAGE LC-MS/MS

• Présentation de l’appareillage
• Infusion et couplage
• Différents modes d’acquisition
• Logiciel de retraitement